通常，以下方法可用於清洗試件：
a .吸收孔中的反應溶液
b .用洗滌液填充板孔。
c靜置2分鍾，輕輕搖晃。
d吸幹孔內液體，或倒出液體，用吸水紙拍幹。
E洗的次數一般是3 ~ 4次，有時甚至是5 ~ 6次。
測試片應考慮這些條件：
a、編號：依次對樣品對應的微孔進行編號，每塊板要有2個陰性對照孔、2個陽性對照孔和1個空白對照孔(空白對照孔不含樣品和酶標試劑，其他步驟相同)B、加樣：分別在陰性和陽性對照孔中加入陰性對照和陽性對照，然後在待測樣品孔中加入樣品稀釋液，再加入待測樣品，將樣品加入酶標板孔中。
c、孵育：用密封膜密封平板，37孵育30分鍾。
d、配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋30倍備用。
e、水洗：小心的剝去封口膜，棄去液體，甩幹，每個孔都灌滿洗滌液，靜置30秒後棄去。重複這個過程5次，拍幹。
抗原的總量可以通過將抗原直接固定在固體載體上並加入酶標記的開始一抗體來確定。這種一抗的特異性非常重要。
優點：操作步驟短，不需要使用二抗就可以避免相互作用反應。待測抗原包被在兩種抗體之間，其中一種抗體將抗原固定在固相載體上，即捕獲抗體，另一種抗體為檢測抗體。這種抗體可以直接用酶標記或者不標記，再用酶標記的二抗來測定。得要仔細選擇這兩種抗體，以避免對同一抗原結合位點的相互反應或競爭。
