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    ATCC菌株穩定整合試驗中的幾個關鍵因素

    2023-04-14

      ATCC菌株是一種具有特殊性質或標誌物的培養物,通過選擇法或克隆形成法從原始培養物或細胞係中獲得。也就是說,ATCC細胞株是由單細胞分離培養或篩選而成的細胞群。細胞株的特殊性質或標誌必須始終存在於整個培養過程中。


      在ATCC細胞株穩定整合試驗中,有幾個關鍵因素:


      外源插入片段的拷貝數量。在大多數情況下,低拷貝甚至單拷貝可以減少人為實驗因素的幹擾。


      二是整合的可能性,這不僅決定了穩定株篩選的難度,而且有助於人們更容易獲得混合穩定株。


      第三,整合位點的轉錄活動,決定了穩定株中外源片段的表現質量。理想情況是單拷貝,但轉錄活性較高。


      4)整合後的穩定性。染色體中外源片段的穩定性由不同的整合位點決定,部分區域容易重組或丟失,導致穩定株再次丟失。


      5)使用混合穩定株或獲得多個不同的單克隆穩定株。由於穩定整合往往伴隨著這種插入失活宿主的內源基因,在實驗中使用混合穩定株或比較多個單克隆穩定株可以幫助研究人員獲得更多的實驗數據。


      一種良好的ATCC細胞株有許多要求:


      產量高,產量高,直接降低固定投資和單一生產成本。


      產品質量符合要求。影響藥效和安全性的產品質量。


      穩定性。在生產傳代過程中,產量和質量不應有較大變化。一般認為60-90PDL產量的變化不超過30%是可以接受的。


      與生產過程相容。細胞株需適用於大規模生產和放大。


      5.合規性。在構建ATCC細胞株的過程中,應避免接觸或使用可能影響安全性的動物源成分或其他成分,以確保單克隆。(clonality)以及整個過程的完整實驗記錄。


      在運輸過程中,冷凍的ATCC細胞株和雜交腐細胞株使用幹冰保持低溫。收到細胞後,可立即解凍複蘇,去除二甲基亞(DSMO0)後進行細胞培養。若不能立即複蘇培養細胞,必須將細胞冷凍管存放在液氮罐氣相層中。請勿將細胞儲存在-130℃以上。若溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力就會立即下降。


      ATCC細胞株產品附有產品數據清單,包括細胞株信息和詳細的操作指南。ATCC可以找到細胞株的所有詳細介紹,ATCC也可以下載產品數據清單。此外,產品還附有細胞株具體生產批次的檢測報告,包括每個冷凍管道中細胞的數量、無微生物汙染的檢測結果等批次的具體信息。


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